生物学简历自我鉴定(热门十篇)

2025-12-12 生物学简历自我鉴定

（1）生物学简历自我鉴定

病原生物学是我院首批确定的重点学科，也是我院第一批硕士学位授予点学科。该学科涵盖了病原微生物学、医学寄生虫学和医学免疫学，探索和研究可致人体疾病的细菌、病毒、寄生虫等病原生物的形态、生存繁殖规律以及与人体疾病的关系，是重要的医学基础学科。

该学科有一支学风严谨、学术水平高、结构合理的师资队伍。现有教授教学和研究生培养中发挥着重要的`生力军作用。有15人在全国学术团体及学术刊物担任理事或编委职位。

该学科有医学寄生虫学、医学免疫学及检验相关课程，覆盖全院专科教材教学、科研和相关企业部门的技术骨干和学术带头人，受到广泛好评。

该学科设有病原生物学研究所，开展了细菌、病毒和寄生虫的分子生物学、免疫学、流行病学、以及相关疾病诊断、治疗方面的研究，先后承担国家免疫学等现代化研究设施，掌握了核酸提取纯化、基因重组表达、活性产物测定、天然活性物质分离、分子免疫学等技术手段，主要从事天然免疫、卡氏肺孢子虫感染治疗与宿主T淋巴细胞亚群相关性、流行性嗜血杆菌基因分型和疫苗、新城疫病毒抗肿瘤作用机制等领域的研究，每年在国内外重要刊物上发表的研究论文数十篇，各级科研获奖多项。

（2）生物学简历自我鉴定

本人性格开朗，活跃，乐观向上，兴趣广泛，做事认真，能吃苦耐劳，工作脚踏实地，有较强的责任心和荣誉感，具有团队合作精神，又具有较强的独立工作能力，思维活跃，创新意识强，善于接受新事物新知识。

工作踏实，勤劳具有极强的责任感，上进心强。对每件事都全身心的不折不扣的将它完成，“要做就最好”这是我处理每件事的目标.自我控制力与自学能力强有良好的沟通能力、协调能力，及较强的服务意识

本人在已从事财务相关的工作已有十年的时间,精通有限公司及个体工商业户的证照办理(如营业执照、税务登记和社保等)、精通一般纳税人和个体户的内外账编制和税务申报等工作，并且一直得到上司好评。因本人为虎门本地人故工作稳定性较高.

本人性格开朗具亲和力，乐观耿直，诚实守信，有良好的心理素质，环境适应性强，有吃苦的精神，做事有毅力，喜欢挑战，行事积极认真富有责任心;能够注意统筹安排，进行有效的自我管理;注重团队协作，善于沟通协调;学习能力强，并喜欢学习和接受新事物，深信有耕耘就会有收获。凭着年轻，我会不懈努力，让自己做得更好。

（3）生物学简历自我鉴定

u orientation 反向（插入）[插入片段与载体方向相反]

ubiquitin 遍在蛋白，泛素[存在于一切真核生物的一种与组蛋白h2共价连接的蛋白]

ultraviolet crossliking 紫外线激发的交联[可用于分析dna结合蛋白]

uncoating 脱壳，脱（外）被[人见于病毒繁殖或受体介导的胞吞作用]

underwinding 欠旋[由负超螺旋引起]

urodilatan 尿舒张肽[一种心钠素衍生肽，可作用于心钠素受体]

uropontin 尿桥蛋白[与骨桥蛋白相关，可抑制草酸钙晶体（肾结石）的形成]

uvomorulin 桑椹（胚）粘着蛋白[一种依赖钙离子的细胞粘着分子，最初发现与鼠桑椹胚发育有关]

（4）生物学简历自我鉴定

高考生物复习知识点分类汇编01

一、生物学中常见化学元素及作用：

1、Ca：人体缺之会患骨软化病，血液中Ca含量低会引起抽搐，过高则会引起肌无力。血液中的Ca具有促进血液凝固的作用，如果用柠檬酸钠或草酸钠除掉血液中的Ca，血液就不会发生凝固。属于植物中不能再得用元素，一旦缺乏，幼嫩的组织会受到伤害。

2、Fe：血红蛋白的组成成分，缺乏会患缺铁性贫血。血红蛋白中的Fe是二价铁，三价铁是不能利用的。属于植物中不能再得用元素，一旦缺乏，幼嫩的组织会受到伤害。

3、Mg：叶绿体的组成元素。很多酶的激活剂。植物缺镁时老叶易出现叶脉失绿。

4、B：促进花粉的萌发和花粉管的伸长，缺乏植物会出现花而不实。

5、I：甲状腺激素的成分，缺乏幼儿会患呆小症，成人会患地方性甲状腺肿。

6、K：血钾含量过低时，会出现心肌的自动节律异常，并导致心律失常。

ATP、蛋白质和核酸的必需元素。N在植物体内形成的化合物都是不稳定的或易溶于水的，故N在植物体内可以自由移动，缺N时，幼叶可向老叶吸收N而导致老叶先黄。N是一种容易造成水域生态系统富营养化的一种化学元素，在水域生态系统中，过多的N与P配合会造成富营养化，在淡水生态系统中的富营养化称为“水华”，在海洋生态系统中的富营养化称为“赤潮”。动物体内缺N，实际就是缺少氨基酸，就会影响到动物体的生长发育。

核酸和ATP的必需元素。植物体内缺P，会影响到DNA的复制和RNA的转录，从而影响到植物的生长发育。P还参与植物光合作用和呼吸作用中的能量传递过程，因为ATP和ADP中都含有磷酸。P也是容易造成水域生态系统富营养化的一种元素。植物缺P时老叶易出现茎叶暗绿或呈紫红色，生育期延迟。

桃等植物的小叶症和丛叶症，叶子变小，节间缩短。2+2+2+

二、生物学中常用的试剂：

和。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。

2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的'测定。

和。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。

。

会被染成蓝色。

会被染成蓝绿色。

打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。

9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。

15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。

2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。

碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。

丙酮：用于提取叶绿体中的色素。

可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。

二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。

碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏。0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的浓度大，可用于质壁分离实验。

0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血。

氯化钠溶液：①可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为0.015mol/L时DNA的溶解度最高，在氯化钠浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最高。②浓度为0.9%时可作为生理盐水。

胰蛋白酶：①可用来分解蛋白质；②可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散。

秋水仙素：人工诱导多倍体试剂。用于萌发的种子或幼苗，可使染色体组加倍，原理是可抑制正在分裂的细胞纺锤体的形成。

三、生物学中常见的物理、化学、生物方法及用途：

X射线、紫外线等。

化学因子：砷、苯、煤焦油

病毒因子：肿瘤病毒或致癌病毒，已发现150多种病毒致癌。

γ射线、紫外线、激光

化学因素：亚硝酸、硫酸二乙酯

振动、电刺激

化学方法：PEG（聚乙二醇）

生物方法：灭活病毒（可用于动物细胞融合）

四、生物学中常见英文缩写名称及作用

1．ATP：三磷酸腺苷，新陈代谢所需能量的直接来源。ATP的结构简式：A—P～P～P，其中：A代表腺苷，P代表磷酸基，～代表高能磷酸键，—代表普通化学键

2．ADP：二磷酸腺苷

3．AMP：一磷酸腺苷

5．DNA：脱氧核糖核酸，是主要的遗传物质。

tRNA和rRNA。

7．cDNA：互补DNA

8．Clon：克隆

：胚胎干细胞

10．GPT：谷丙转氨酶，能把谷氨酸上的氨基转移给丙酮酸，它在人的肝脏中含量最多，作为诊断是否患肝炎的一项指标。

11．HIV：人类免疫缺陷病毒。艾滋病是英语“AIDS”中文名称。

12．HLA：人类白细胞抗原，器官移植的成败，主要取决于供者与受者的HLA是否一致或相近。

13．HGP：人类基因组计划

15．CTK：细胞分裂素

16．NADP：辅酶Ⅱ

：还原型辅酶Ⅱ

18．NAD：辅酶Ⅰ

：还原型辅酶Ⅰ

DNA聚合酶、引物、4种脱氧核苷酸等。

21．PEG：聚乙二醇，诱导细胞融合的诱导剂。

22．PEP：磷酸烯醇式丙酮酸，参与C4途径。

五、人体正常生理指标：

1、血液pH：7.35~7.45

2、血糖含量：80~120mg/dl。高血糖：130mg/dl，肾糖阈：160~180mg/dl，早期低血糖：50~60mg/dl，晚期低血糖：＜45mg/dl。

3、体温：37℃左右。直肠(36.9℃~37.9℃，平均37.5℃)；口腔(36.7℃~37.7℃，平均37.2℃)；腋窝(36.0℃~37.4℃，平均36.8℃)

4、总胆固醇：110~230mg/dl血清

6、甘油三脂：20~110mg/dl血清

六、高中生物常见化学反应方程式：

1、ATP合成反应方程式：ATP→ADP＋Pi＋能量

2、光合反应：总反应方程式：6CO2＋12H2O→C6H12O6＋6H2O＋6O2

分步反应：①光反应：2H2O→4[H]＋O2ADP＋Pi＋能量→ATPNADP＋2e＋H→NADPH++

②暗反应：CO2＋C5→C32C3→C6H12O6＋C5

3、呼吸反应：

（1）有氧呼吸总反应方程式：C6H12O6＋6H2O＋6O2→6CO2＋12H2O＋能量

分步反应：①C

②

③

（

①C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2＋2ATP

②C6H12O6→2C3H6O3＋2ATP

H2O

5、固氮反应：N2＋e＋H＋ATP→NH3＋ADP＋Pi+

七、生物学中出现的人体常见疾病：

①风湿性心脏病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼（自身免疫病。免疫机制过高）

②艾滋病（免疫缺陷病）胸腺素可促进T细胞的分化、成熟，临床上常用于治疗细胞免疫功能缺陷功低下患者。

八、人类几种遗传病及显隐性关系：

九、高中生物学中涉及到的微生物：

①动物病毒：RNA类（脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、流感病毒、艾滋病病毒、口蹄疫病毒、脑膜炎病毒、SARS病毒）

DNA类（痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、虹彩病毒、乙肝病毒）

②植物病毒：RNA类（烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、黄瓜花叶病毒、大麦黄化病毒等）③微生物病毒：噬菌体

、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体。

①细菌：三册书中所涉及的所有细菌的种类；

②乳酸菌、硝化细菌（代谢类型）；

（5）生物学简历自我鉴定

有些求职者在编写个人简历时非常随性，在细节上丝毫不注意。但是细节决定成败，你的个人简历跟有可能是败在了细节上。

个人信息

yjbys

性别：男

年龄： 42岁民族：汉

工作经验：以上居住地：浙江台州温岭市

身高： CM 户口：浙江台州温岭市

自我评价

有教师证

擅长人员管理及各类培训/擅长小班化教育/一对一教育辅导

销售培训

初中理科(数学、理化)

高中化学

求职意向

希望岗位：文体/教育类-中级教育文体/教育类-家教培训类-职业教育/培训

寻求职位：人力资源、教育培训、企划、管理

希望工作地点：浙江台州温岭市

期望工资： 10000 /月(可面议) 到岗时间：随时到岗

其它待遇要求：工作地点温岭太平街道或附近地区

工作目标 / 发展方向

工作地点温岭太平街道及附近地区

工作经历

▌-03---02：锐辅教育

所属行业：教育、培训、科研院所(民营企业)

担任岗位：文体/教育类/家教

职位名称：教师

职位描述：初中科学、高中化学

▌-01--2014-02：合众人寿

所属行业：其他(股份制企业)

担任岗位：咨询/顾问类/专业顾问

职位名称：培训负责人、县公司负责人

职位描述：招聘、培训、业务策划推动、人员绩效管理

▌-12--2011-01：泰康人寿

所属行业：其他(股份制企业)

担任岗位：咨询/顾问类/专业顾问

职位名称：业务

职位描述：12月前做业务，月-，招聘、培训、业务策划、行政管理

▌-09--2002-07：滨海中学

所属行业：教育、培训、科研院所(事业单位)

担任岗位：咨询/顾问类/专业顾问

职位名称：自然科学教师

职位描述：自然科学教师

▌2015-03--至今：学大教育

所属行业：教育、培训、科研院所(股份制企业)

担任岗位：文体/教育类/家教

职位名称：教师

职位描述：初中科学，高中化学、生物，高中物理、初中数学也能教

教育经历

1994-09--1998-07 四川大学化学工程类/生物化学本科

拓展阅读：个人简历中低级且致命的错误

如今社会就业压力越来越大，求职者越来越多导致用人单位的工作岗位供不应求。在这个竞争激烈的社会想要在众多求职者中脱颖而出就要学会制作个人简历，好的.个人简历能让求职者在求职路上走的顺风顺水。同理，一份有问题的个人简历也会使求职者的求职路坎坷万分。求职者在制作好个人简历之后一定要做简历检查，这是杜绝致命错误的基本方式。在检查中要注意在个人简历中有没有出现以下三点问题。

① 个人简历语言使用拖沓

在个人简历中使用语言首先就要做到言简意赅，用精简的语句表达出求职者准确的意思。这种个人简历才能博取招聘官的好感，在个人简历中语言使用拖沓无疑是一个致命的错误。

② 在个人简历中语气词使用过多

求职者在制作个人简历时最好是通篇用陈述句。因为个人简历就像是求职者的自我介绍而不是招聘官的问卷调查不用声情并茂的编写，所以在制作个人简历时尽量不要出现语气词。会让招聘官认为求职者是个娇嗔不干练的人。

③ 在制作个人简历中不要主观性太强

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现代人通常都有很强的主观性，但是这种主观性在制作个人简历中一点也不适用。在编写个人简历时不要用主观性太强的词语。比如说，我认为…… 我感觉…… 我想……这类主观性过强的词语在招聘官看来会非常排斥。

求职者在制作个人简历时要注意不要出现以上三点这种低级但致命的错误。

（6）生物学简历自我鉴定

本人自毕业以来曾在手机专卖店担任营业员、收银以及店长，曾在安利中国公司担任营销员，曾在安踏专卖店担任营销员、收银工作。本人热爱工作，不畏艰辛，任劳任怨，在学习与工作之佘能努力学习各种知识包括理财、营销、市场管理、与人员交流等等。本人熟悉电脑操作。

有很好的统筹能力和协调沟通能力，配合领导完成全面工作并把领导的思想更好地传达给每一位销售经理。在工作中获得过很高的评价及良好的客户满意度。思想严密、逻辑清晰、性格开朗、待人真诚、具有强烈的责任心和事业心，具备很好的分析和解决问题的能力。喜欢接受难度较大的工作挑战，精通各种办公软件，英文口语流利。

为人诚恳，乐观开朗，富拼搏精神，能吃苦耐劳。工作积极主动、认真踏实，有强烈的责任心和团队合作精神，有较强的学习和适应新环境的能力，求知欲望强烈，进取心强，乐于助人，爱交际，人际关系好。

仓库管理专业自我评价：

本人沉着稳重，性格外向，学习能力强有较强的组织能力。能熟练运用办公软件/erp操作等，了解基础的市场营销学和一些经济方面的知识，在这一年的工作中积累一些仓库管理方面的知识。

本人在校期间，我努力参加校内外的各项活动，先后加入了自动化系青年志愿者协会和中国青年志愿者协会，我在奉献爱心与真诚的过程中培养了团队协作和互助友爱的精神，并且从中深深体会到：专业的学习只是让我拥有了技能，而学校环境的熏陶和塑造才真正让我在精神上成人。

今天，我和所有毕业在即的青年朋友们一样，满怀激动和豪情立于人生的十字路口，准备迎接未来的机遇和挑战。我相信，拥有良好的专业知识功底、优秀的学习能力和坚韧、积极进取的工作精神的我一定能很快适应新的工作环境，将自己的所学运用到工作中去，用我踏实、热情、积极进取的工作作风去取得新的成绩!

给我一次机会，我会倍加努力，让您惊喜。衷心期待能在未来不久的日子里有机会向您学习并能与您携手共进!

诚祝：贵单位事业兴旺发达，您工作顺利!

（7）生物学简历自我鉴定

虽然我是应届毕业生，但我有热情，因为有梦想，我愿披星戴月，只争朝夕;我具备应付突发事件的能力，也许做不到泰山崩于前而完全不变色，但也能够保持“行到水穷处，坐看云起时”的冷静;我能吃苦，因为我深深领悟到“不知一番寒彻苦，哪得梅香扑鼻来”的道理;我有较强的上进心和较高的学习能力，因为我明白“人间所得容力取，世外无物谁为雄”;当然“人无完人，金无赤金”，作为应届毕业生的我也清楚自己的种种不足，如缺乏工作经验，对事情估计不足，但我会尽快成长起来，成为贵单位一名合格并且优秀的员工。我想贵单位能在本着“只选对的，不选贵的”的用人前提下，给我一个机会让我和您在第一时间，第一印象，分享阳光，分担风雨。

本人性格：

开朗、关于沟通、热情、执着、好学、谦虚、能吃苦。

（8）生物学简历自我鉴定

（一）具有3年多大中型食品生产企业生产现场管理的经验，在职期间担任过车间生产产品工艺改进和新产品试制工艺的制定以及车间改造的项目负责人。熟悉出口卫生注册申请及生产许可证（qs）申请工作。熟悉oa系统、erp系统在生产管理中的运用。掌握iso9000，haccp，gmp，ssop，6s等知识。具有食品加工和食品包装知识。熟悉食品行业的相关法律和法规。

（二）本人自信开朗，爱好广泛，责任心强。勤奋好学，善于思考，有较强的交际沟通能力和团队精神。能够吃苦耐劳并适应各种环境，勇于迎接新挑战。

（三）1、具有良好的食品开发能力和创新意识，而且具备质量管理经验及检验能力，能对开发出的产品制定相关的技术标准和质量标准。2、能处理常见的计算机故障，熟练操作word，excel等常用办公软件。3、熟悉oa系统、erp系统在生产管理中的运用。4、掌握了iso9000，haccp，gmp，ssop，6s等知识。5、熟悉食品行业的相关法律和法规。

（四）2年以上食品企业质检和分析工作经验，参与过haccp、iso22000质量体系认证，拥有haccp内部审核员证书，熟悉相关规范；熟悉质量部门sop文件编写，精通各种分析仪器、检测设备的操作。能对相关操作人员进行管理、培训及考核。

（9）生物学简历自我鉴定

光阴似箭,日月如梭，作为病原生物学专业的我即将告别大学生活。在×××（改成自己病原生物学就读的大学）病原生物学专业四年的大学校园生活是我人生的一大转折点，四年的校园生涯和病原生物学社会实践生活，有过渴望、有过追求、有过成功也有过失败，我不断地挑战自我，充实自我，学习病原生物学理论知识，为步入社会和实现人生的价值打下坚实的基础。

在思想品德上，本人有良好的思想道德修养，并有较高的政治理论觉悟，平时积极地向病原生物学班委团委组织靠拢，参与病原生物学专业学生集体社区服务活动。在生活中，本人遵纪守法，经常关心和帮助病原生物学班其他同学，并以务实求真的精神热心参与各项社会活动与病原生物学知识公益宣传。

在学习上，我热爱自己所就读的病原生物学专业，各门基础公共课程和病原生物学专业课程均取得了比较理想的成绩。此外，我还参加病原生物学相关资格考试××××（列举自己获得的病原生物学专业证书）。

在病原生物学专业实习期间，我经历里学校所没有的酸甜苦辣，感受病原生物学专业就业严峻的压力，也切身体会到父母劳作的艰

（10）生物学简历自我鉴定

质粒DNA的提取、纯化及检测

姓名：XXX学号：2011001400XX年级：20XX级生物基地班实验日期：2013年9月16日—30日组别：6组同组者：XX

一、【实验目的】

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒DNA的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法。

二、【实验原理】

1、质粒DNA的制备方法

质粒（Plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链DNA分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200Kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的DNA。

质粒DNA的制备包括质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒DNA。

2、质粒DNA的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体DNA和质粒DNA均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶pH值不同。在pH值高达高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒DNA可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体DNA不能复性，而是与不稳定的大分子RNA、蛋白质—SDS复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒DNA分离。溶于上清液的质粒DNA，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性质类似，乙醇沉淀

DNA的同时，也伴随着RNA沉淀，可利用RNaseA将RNA降解。质粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒DNA。

3、凝胶电泳进行DNA分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定pH条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的DNA条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差，小片段DNA（最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定DNA的相对分子质量，分离经限制酶水解的DNA的片段，进一步纯化DNA等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。DNA在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于DNA分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

三、【实验材料】

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

LB培养基，抗生素Ap（氨苄青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（PCI）混合液，预冷无水乙醇，TAE电泳缓冲液（，上样缓冲液（，琼脂糖，溴化乙锭（EB），DNA相对分子质量标准物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5。2的醋酸钠。

四、【实验步骤】

1、准备实验

配制LB液体培养基，分装到10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有Ap的LB平板上挑取一环携带有质粒pUC19的E。coli DH5单菌落，接种于20mlLB液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加Ap100ul

（，质粒pUC19具有Ap抗性基因，使得带有pUC19的质粒得以生长。过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mlLB液体培养基中，培养基中加入Ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（吹吸混匀，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生长。Tris—Cl溶液提供适当的pH。

（，轻加轻摇，冰浴结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体DNA、质粒DNA和蛋白质变性；SDS为下一步沉淀做铺垫。

（，轻加轻摇，冰浴细胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断基因组DNA，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被PDS共沉淀。同时变性的质粒DNA复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3MNaAc混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀。

（7）以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部DNA沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将DNA沉淀溶于1mlTE缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个Eppendorf管中。TE是pH缓冲液，为DNA提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有EDTA是二价阳离子的螯合剂，抑制DNA酶作用。

4、质粒纯化

（，37℃保温0。5—1h

（Tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的Eppendorf管中。苯酚是经Tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（苯酚/氯仿溶液（，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的Eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响DNA的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的Eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的NaAc混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到DNA沉淀，为白色。

（7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部DNA沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulTE溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×TAE电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×TAE 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（的移动。

（4）把胶槽取出，小心滑出胶块，放进EB溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

五、【注意事项】